Šeit mēs izveidojam sCRAM (suboptimāls protospacer blakus motīvs (PAM){0}}mediētā CRISPR RNS un Cas12a nukleāze apvienojumā ar daudzu enzīmu izotermisku ātru pastiprināšanu), ātra un ekstrakcijas -bezmaksas diagnostikas platforma, kas nosaka ĀCM 20 minūšu laikā. sCRAM integrē ātru nukleīnskābju atbrīvošanas posmu (40 grādi, 5 min) ar vienas mēģenes reakciju, kas apvieno multienzīmu izotermisko amplifikāciju (MIRA) un suboptimālu PAM{8}}mediētu CRISPR/
Cas12a sistēma (37 grādi, 15 min), kas nodrošina instrumenta-bezmaksas vizuālo nolasīšanu, izmantojot UV gaismu vai sānu plūsmas sloksnes (LFS). sCRAM demonstrē vienas-kopijas noteikšanas jutību un neuzrāda krustenisku-reaktivitāti ar pieciem izplatītiem cūku patogēniem (PRRSV, PCV, PPV, PREV, JEVV). Novērtējot 111 simulētus un klīniskus paraugus (tostarp asinis, plazmu un uztriepes) atklāja 100 % atbilstību qPCR UV nolasīšanai un 98,20 % LFS.
abām metodēm uzrāda 100 % specifiskumu. sCRAM vienkāršība, ātrums un lauka pielāgošanās spēja uzsver tās potenciālu decentralizētai ASFV uzraudzībai ierobežotos resursu-iestatījumos, piedāvājot jaudīgu rīku slimības uzliesmojuma ierobežošanai.
Šajā pētījumā mēs izstrādājām sCRAM — ātru un{0}}izvietojamu ASFV noteikšanas platformu, kas integrē suboptimālu PAM-mediētu CRISPR/Cas12a ar vairāku enzīmu izotermisko pastiprināšanu. Tests sasniedz vienu-kopiju 1 kopiju/uL 20 minūšu laikā un neuzrāda krustenisku-reaktivitāti ar galvenajiem cūku patogēniem. Asins, plazmas un tamponu paraugu klīniskā validācija parādīja pilnīgu atbilstību qPCR, izmantojot UV gaismas nolasījumu, un 98,20% precizitāti, izmantojot sānu plūsmas sloksnes. Pateicoties vienkāršotai darbībai, augstajai jutībai un specifiskumam, kā arī vizuālo rezultātu interpretācijai, sCRAM piedāvā lielu potenciālu ASFV uzraudzībai uz vietas un plašākas{12}}aprūpes diagnostikas lietojumprogrammām.
